ARID3B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411492-ACT

ARID3B (AT-rich interaction domain 3B) codifica un fattore di trascrizione legante il DNA della famiglia ARID che regola programmi di espressione genica dipendenti dalla cromatina durante lo sviluppo e la specificazione di linea cellulare. Interagendo con elementi regolatori ricchi di AT e cooperando con altri regolatori trascrizionali, ARID3B influenza processi quali la determinazione del destino cellulare, il controllo della proliferazione e reti trascrizionali associate alla differenziazione. Un’espressione alterata di ARID3B è stata riportata in molteplici contesti oncologici e in altri disturbi proliferativi, nei quali una regolazione trascrizionale deregolata può influire su vie legate a crescita, sopravvivenza e identità cellulare. Queste caratteristiche rendono ARID3B un nodo utile per studiare i circuiti trascrizionali, la regolazione epigenetica e il rimodellamento delle reti di regolazione genica nelle cellule umane.

ARID3B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARID3B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ARID3B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARID3B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARID3B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ARID3B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARID3B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ARID3B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ARID3B nelle cellule tumorali con espressione di ARID3B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.