ARID2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401863-ACT

ARID2 codifica una subunità del complesso PBAF (SWI/SNF) di rimodellamento della cromatina ATP-dipendente contenente un dominio di interazione AT-rich, che regola il posizionamento dei nucleosomi e i programmi trascrizionali. Coordinando l’accessibilità di enhancer e promotori, ARID2 influenza la specificazione di linea, le risposte al danno al DNA e gli stati di differenziamento cellulare. Un’attività alterata di ARID2 è stata associata a un controllo epigenetico deregolato e a reti trascrizionali implicate nella tumorigenesi e in altre malattie caratterizzate da una regolazione anomala della cromatina. In quanto componente del rimodellamento della cromatina, ARID2 viene comunemente studiato in vie che governano la stabilità del genoma, la regolazione dei geni stimolati dall’interferone e il controllo, dipendente dal contesto, del ciclo cellulare e dell’apoptosi.

ARID2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARID2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ARID2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARID2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARID2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ARID2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARID2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ARID2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ARID2 nelle cellule tumorali con espressione di ARID2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.