Plásmido CRISPR de Activación (h) ARID2: sc-401863-ACT

ARID2 codifica una subunidad del complejo de remodelación de cromatina PBAF (SWI/SNF) dependiente de ATP que contiene un dominio de interacción con regiones ricas en AT y que regula el posicionamiento de los nucleosomas y los programas transcripcionales. Mediante la coordinación de la accesibilidad de potenciadores (enhancers) y promotores, ARID2 influye en la especificación de linaje, las respuestas al daño del ADN y los estados de diferenciación celular. La alteración de la actividad de ARID2 se ha asociado con un control epigenético desregulado y con redes transcripcionales implicadas en la tumorogénesis y otras enfermedades caracterizadas por una regulación anómala de la cromatina. Como componente de un remodelador de cromatina, ARID2 se estudia comúnmente en vías que gobiernan la estabilidad del genoma, la regulación de genes estimulados por interferón y el control dependiente del contexto del ciclo celular y la apoptosis.

ARID2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARID2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARID2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARID2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARID2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARID2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARID2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARID2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARID2 en células tumorales con expresión de ARID2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.