ARID1A Plasmide Double Nickase (h): sc-400469-NIC

ARID1A (AT-rich interaction domain 1A) codifica una subunità centrale del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) ATP-dipendente, che modula il posizionamento dei nucleosomi per regolare i programmi trascrizionali. Attraverso il controllo dell’accessibilità della cromatina, ARID1A influenza l’attività degli enhancer, l’espressione di geni che definiscono la linea cellulare, le risposte al danno al DNA e i processi associati alla replicazione che modellano la progressione del ciclo cellulare e la stabilità del genoma. La funzione di ARID1A si interseca con vie che governano la regolazione epigenetica e la trascrizione in risposta allo stress, inclusi il crosstalk con la segnalazione PI3K/AKT e le reti associate a p53. Alterazioni di ARID1A sono frequentemente osservate in molti tumori umani e sono ampiamente studiate per il loro impatto sullo stato della cromatina, sulla disregolazione trascrizionale e sulla biologia dei geni oncosoppressori.

ARID1A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARID1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARID1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARID1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARID1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.