APRIL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403296-ACT

TNFSF12-TNFSF13 codifica APRIL (ligante indutor de proliferação; TNFSF13), uma citocina da superfamília TNF que regula a maturação de células B, a troca de classe de imunoglobulinas e a sobrevivência de plasmócitos. APRIL sinaliza principalmente por meio de TNFRSF13B (TACI) e TNFRSF17 (BCMA) para ativar o NF-κB e programas relacionados de sobrevivência e diferenciação, moldando a homeostase da imunidade humoral. A atividade aberrante de APRIL tem sido associada a respostas desreguladas de células B e a microambientes inflamatórios, com relevância para a autoimunidade e para a biologia de neoplasias associadas a células B. Em contextos teciduais e tumorais, APRIL pode modular a comunicação entre células imunes e as interações com o estroma que influenciam fenótipos de proliferação e sobrevivência.

APRIL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFSF12-TNFSF13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APRIL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFSF12-TNFSF13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFSF12-TNFSF13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APRIL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFSF12-TNFSF13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APRIL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APRIL em células tumorais com expressão de TNFSF12-TNFSF13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.