ApoER2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403253-ACT

O LRP8 codifica o receptor 2 da apolipoproteína E (ApoER2), um membro da família de receptores de LDL que medeia a endocitose e a transdução de sinais em neurónios e células vasculares. O ApoER2 funciona como recetor da Reelin e de lipoproteínas contendo ApoE, apoiando a migração neuronal, a plasticidade sináptica e a remodelação do citoesqueleto através de sinalização a jusante dependente de Dab1 e de interações com as vias PI3K/AKT e quinases da família Src. No sistema nervoso central, o LRP8 influencia o tráfego de recetores glutamatérgicos e a potenciação de longa duração, ligando a sua regulação a mecanismos de aprendizagem e memória. A desregulação da sinalização do ApoER2 e o equilíbrio entre isoformas têm sido associados a fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, e o LRP8 também é estudado no processamento de lípidos e na biologia das plaquetas, relevantes para a patologia vascular.

ApoER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRP8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ApoER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRP8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRP8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ApoER2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRP8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ApoER2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ApoER2 em células tumorais com expressão de LRP8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.