apoB Plasmide Double Nickase (h): sc-400705-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- apoB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il apoB Double Nickase Plasmid (h) e il apoB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APOB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: apoB Antibody (A-6): sc-393636
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
apoB Plasmide Double Nickase (h) | sc-400705-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
apoB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400705-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOB codifica l’apolipoproteina B (apoB), un componente strutturale essenziale delle lipoproteine aterogene che funge da impalcatura per l’assemblaggio delle lipoproteine a bassissima densità (VLDL) negli epatociti e viene processata in apoB-100 per la circolazione. ApoB coordina la lipidazione e la secrezione di particelle ricche di trigliceridi e colesterolo attraverso vie che coinvolgono la proteina microsomiale di trasferimento dei trigliceridi (MTP) e il programma secretorio del reticolo endoplasmatico. Nei tessuti periferici, le lipoproteine contenenti apoB sono centrali per l’assorbimento mediato dal recettore delle LDL, collegando il trasporto dei lipidi all’omeostasi del colesterolo cellulare e alla segnalazione a valle. Alterazioni dell’espressione di APOB o della produzione di particelle apoB sono associate a dislipidemia e a patologie vascolari guidate dai lipidi, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici del metabolismo delle lipoproteine.
apoB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APOB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APOB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APOB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APOB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.