APLP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403937-ACT

A APLP1 humana (proteína 1 semelhante ao precursor de beta-amiloide) é uma glicoproteína transmembranar do tipo I enriquecida em neurônios e funcionalmente relacionada à família de genes APP. Ela contribui para a formação e a manutenção de sinapses, o crescimento de neuritos e a sinalização dependente de atividade, em parte por meio de proteólise regulada e de efeitos transcricionais mediados pelo domínio intracelular. A APLP1 participa de processos de adesão célula–célula e de vias de tráfego intracelular que moldam a conectividade neuronal e a plasticidade sináptica. O processamento desregulado da família APP e a disfunção sináptica conectam vias associadas à APLP1 a mecanismos estudados na neurodegeneração e em fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-a relevante para dissecar redes de sinalização neuronal.

APLP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APLP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APLP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APLP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APLP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APLP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APLP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APLP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APLP1 em células tumorais com expressão de APLP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.