APC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405103-ACT

ヒトANAPC1は、有糸分裂およびG1期における秩序だったタンパク質分解を協調的に制御する、必須のE3ユビキチンリガーゼであるアナフェーズ促進複合体／サイクロソーム（APC/C）の中核的な足場サブユニットAPC1をコードしています。APC/CがCDC20やCDH1などの共活性化因子と相互作用することで、APC1は主要な細胞周期制御因子のユビキチン化と分解を支え、紡錘体チェックポイントの制御、有糸分裂の終結、そしてゲノム安定性の維持を担います。APC/C活性および関連するユビキチン–プロテアソーム経路の破綻は、染色体不安定性や増殖シグナルの変調と関連しており、ANAPC1は細胞周期制御やがん関連表現型の研究における重要な解析対象となります。

APC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANAPC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

APC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANAPC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANAPC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性APC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANAPC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAPC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANAPC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAPC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。