ANO4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406887-ACT

ヒトANO4（anoctamin 4）遺伝子は、細胞膜における陰イオンおよびリン脂質の輸送に関与するとされる、多回膜貫通型膜タンパク質であるTMEM16／アノクタミンファミリーの一員をコードしています。ANO4の活性は、リン脂質スクランブリングなどの過程を含むCa2+制御性の膜リモデリングと関連づけられており、これらは小胞輸送、細胞シグナル伝達、ストレス応答に影響し得ます。こうした役割を通じて、ANO4は細胞内カルシウム動態を膜組成や興奮性の変化へと結び付ける経路と交差します。ANO4を含むTMEM16ファミリー機能の変化は、神経系表現型、血小板および免疫細胞の生物学、ならびにがんに関連した膜シグナル伝達の適応に関する研究において関心を集めています。

ANO4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANO4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANO4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANO4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANO4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANO4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANO4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANO4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANO4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANO4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。