ANO10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417456

Panoramica

ANO10 (anoctamin 10/TMEM16K) è un membro della famiglia TMEM16 residente nel reticolo endoplasmatico, implicato nello scrambling dei fosfolipidi e nella dinamica di membrana regolata dal Ca2+. Contribuisce all’omeostasi del RE, alla distribuzione dei lipidi e a processi a valle, tra cui il traffico vescicolare, la funzione dei siti di contatto tra organelli e le vie di segnalazione della risposta allo stress. L’alterazione genetica di ANO10 è associata all’atassia spinocerebellare autosomica recessiva e a fenotipi neurodegenerativi correlati, a supporto di un ruolo nel mantenimento neuronale e nella regolazione dei lipidi di membrana. ANO10 è pertanto studiato in modelli cellulari di neurobiologia, stress del RE e segnalazione mediata dai lipidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ANO10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ANO10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ANO10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ANO10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ANO10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ANO10 per lo studio della segnalazione di ANO10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ANO10 critici per la funzione di ANO10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ANO10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ANO10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ANO10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ANO10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ANO10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ANO10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ANO10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ANO10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.