Annexin IV Plasmide Double Nickase (h): sc-402134-NIC

ANXA4 codifica l'annessina IV, una proteina di legame ai fosfolipidi dipendente dal Ca²⁺ che si associa al foglietto interno della membrana plasmatica e alle endomembrane per regolare l'organizzazione e la curvatura delle membrane e il traffico vescicolare. L'annessina IV partecipa alla segnalazione responsiva al Ca²⁺ e alla dinamica del citoscheletro, influenzando processi quali esocitosi, endocitosi e trasporto ionico epiteliale, ed è stata collegata anche alla modulazione della riparazione di membrana e delle risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell'espressione di ANXA4 sono state riportate in molteplici contesti tumorali e in condizioni infiammatorie, dove viene studiata per i suoi ruoli nella sopravvivenza cellulare, nella migrazione e nei fenotipi di risposta ai farmaci. Queste caratteristiche rendono ANXA4 un bersaglio utile per analizzare vie associate alle membrane rilevanti per la biologia epiteliale e il comportamento delle cellule tumorali.

Annexin IV Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANXA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANXA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANXA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANXA4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.