Amylase 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419103

Panoramica

Il gene murino Amy1 codifica l’amilasi 1, un’idrolasi glicosidica secreta che catalizza l’endohidrolisi dei legami glicosidici α-1,4 in amido e glicogeno, generando maltosio e oligosaccaridi. Regolando le primissime fasi della digestione dei carboidrati, AMY1 influenza la disponibilità di glucosio nel lume e la successiva segnalazione metabolica, incluse le vie di nutrient sensing che modellano l’ecologia epiteliale e microbica. Le variazioni dell’attività dell’amilasi sono state collegate alla gestione dei carboidrati nella dieta e sono state esplorate in relazione a fenotipi metabolici quali obesità e insulino-resistenza, a supporto della sua rilevanza nelle interazioni tra nutrizione e metabolismo. Nel topo, Amy1 costituisce un modello maneggevole per studiare la regolazione degli enzimi digestivi, la biologia delle proteine secrete e gli effetti gene–dieta sulla fisiologia sistemica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Amylase 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Amy1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Amy1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Amy1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Amylase 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Amy1 per lo studio della segnalazione di Amylase 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Amy1 critici per la funzione di Amylase 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Amy1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Amylase 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Amylase 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Amy1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Amylase 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Amylase 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Amy1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Amy1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.