ALS2CL Plasmide Double Nickase (h): sc-417873-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALS2CL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ALS2CL Double Nickase Plasmid (h) e il ALS2CL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ALS2CL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ALS2CL Antibody (E-8): sc-377278
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALS2CL Plasmide Double Nickase (h) | sc-417873-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALS2CL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417873-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALS2CL (ALS2 C-terminal like) codifica una proteina citosolica implicata nel traffico di membrane e nella dinamica degli endosomi, con interazioni riportate che la collegano a vie di trasporto regolate da piccole GTPasi. ALS2CL viene studiata nel contesto della biologia cellulare neuronale, in cui la maturazione degli endosomi, il riciclo delle vescicole e l’accoppiamento con il citoscheletro sono essenziali per mantenere l’omeostasi e la segnalazione assonale. Un’alterata regolazione del trasporto endolisosomiale e delle vie correlate di proteostasi è rilevante per la neurodegenerazione, e ALS2CL è stata investigata insieme a meccanismi associati ad ALS2 nella vulnerabilità dei motoneuroni. Di conseguenza, ALS2CL è spesso utilizzata come nodo per esplorare il traffico intracellulare, le risposte allo stress e i programmi di mantenimento neuronale in modelli cellulari umani.
ALS2CL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALS2CL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALS2CL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALS2CL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALS2CL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.