ALKBH8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426676-ACT

O gene murino **Alkbh8** codifica a **ALKBH8**, uma enzima de modificação de tRNA que sustenta a fidelidade da tradução ao catalisar etapas-chave da química da uridina na posição *wobble*, incluindo metilação e modificações oxidativas que influenciam a decodificação de códons. Ao regular a eficiência de decodificação dependente de tRNA, a ALKBH8 impacta a homeostase proteica e vias de adaptação ao estresse celular, particularmente sob condições oxidativas e genotóxicas. Alterações na atividade da ALKBH8 têm sido associadas a paisagens desreguladas de modificações de RNA, que podem influenciar a estabilidade do genoma, a sinalização de resposta ao estresse e programas de sobrevivência celular relevantes para a biologia do câncer e modelos de lesão tecidual inflamatória. Como um ponto nodal no controle epitranscriptômico da tradução, **Alkbh8** é frequentemente estudado no contexto de equilíbrio redox, respostas a dano no DNA e fenótipos associados à proteostase.

ALKBH8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Alkbh8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ALKBH8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Alkbh8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Alkbh8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ALKBH8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Alkbh8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ALKBH8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ALKBH8 em células tumorais com expressão de Alkbh8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.