Aldolase B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432929

Panoramica

Aldob codifica l’aldolasi B, un enzima glicolitico e fruttolitico che scinde il fruttosio-1,6-bisfosfato e il fruttosio-1-fosfato per generare fosfati trioso, collegando la degradazione dei carboidrati alla produzione di energia a valle e ai flussi biosintetici. Nel topo, l’attività dell’aldolasi B è particolarmente evidente negli epatociti e nelle cellule del tubulo prossimale renale, supportando l’omeostasi glucidica epatica, il metabolismo del fruttosio e l’adattamento metabolico durante i cicli di digiuno e alimentazione. La compromissione della funzione di ALDOB è classicamente associata a un’alterata gestione del fruttosio e a più ampie perturbazioni dell’equilibrio glicolisi/gluconeogenesi, rendendolo rilevante per lo studio delle risposte allo stress metabolico e della fisiologia degli epatociti. Aldob rappresenta inoltre un nodo facilmente interrogabile per analizzare il crosstalk tra glicolisi, gluconeogenesi e segnalazione indotta dal fruttosio in modelli di malattia incentrati sul fegato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aldob in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aldob insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aldob a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aldolase B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aldob per lo studio della segnalazione di Aldolase B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aldob critici per la funzione di Aldolase B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aldob per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aldolase B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aldolase B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aldob. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aldolase B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aldolase B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aldob per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aldob definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.