AIRE-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401225-ACT

O regulador autoimune (AIRE; AIRE-1) é um regulador transcricional nuclear que promove a tolerância imunológica central ao induzir a expressão promíscua de antígenos restritos a determinados tecidos em células epiteliais tímicas medulares. Por meio de interações com fatores associados à cromatina e com a maquinaria de transcrição, o AIRE sustenta vias de apresentação de antígenos e a seleção negativa de células T autorreativas, moldando o desenvolvimento do repertório de células T. A disrupção de programas transcricionais dependentes de AIRE está ligada à quebra da tolerância imunológica e à autoimunidade órgão-específica, incluindo síndromes poliendócrinas autoimunes. Por isso, o AIRE é amplamente estudado no controle transcricional, na biologia das células epiteliais do timo e nos mecanismos subjacentes à suscetibilidade autoimune.

AIRE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AIRE sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AIRE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AIRE em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AIRE, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AIRE-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AIRE nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AIRE-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AIRE-1 em células tumorais com expressão de AIRE silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.