ADPN Plasmide Double Nickase (h): sc-406096-NIC

PNPLA3 codifica adiponutrina (ADPN), una fosfolipasi di tipo patatina localizzata sulle goccioline lipidiche che regola l’idrolisi dei trigliceridi e l’attività aciltransferasica negli epatociti e negli adipociti. ADPN integra segnali nutrizionali e ormonali per modulare il rimodellamento lipidico, l’accoppiamento con la lipogenesi de novo e il turnover delle goccioline lipidiche, collegando lo stato metabolico all’immagazzinamento intracellulare dei lipidi. Le varianti genetiche e l’alterata espressione di PNPLA3 sono fortemente associate all’accumulo di grasso epatico e alla progressione dei fenotipi di fegato grasso, e vengono studiate nel contesto di steatosi, infiammazione e segnali fibrogenici. Di conseguenza, PNPLA3/ADPN è ampiamente utilizzato come punto di ingresso molecolare per analizzare le vie del metabolismo lipidico e le risposte allo stress a valle in modelli cellulari umani.

ADPN Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PNPLA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PNPLA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PNPLA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PNPLA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.