ADO Plasmide Double Nickase (h): sc-408985-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADO Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADO Double Nickase Plasmid (h) e il ADO Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADO. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADO Antibody (E-11): sc-515318
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADO Plasmide Double Nickase (h) | sc-408985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADO Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ADO umano (2-amminoetanetiolo diossigenasi) è un enzima del ferro non-eme che catalizza l’ossigenazione della cisteamina a ipotaurina, collegando il turnover del coenzima A alla biosintesi della taurina e all’equilibrio redox cellulare. Controllando il flusso di aminotioli reattivi, l’ADO influenza l’omeostasi dei tioli, la capacità antiossidante e l’adattamento metabolico allo stress ossidativo e nutrizionale. L’asse cisteamina–ipotaurina dipendente da ADO interseca il metabolismo degli amminoacidi solforati e può modulare processi a valle come la funzione mitocondriale e la segnalazione infiammatoria. Alterazioni del metabolismo degli aminotioli e della disponibilità di taurina sono state associate a fenotipi cardiometabolici e neurobiologici, rendendo l’ADO un bersaglio utile per studi meccanicistici del metabolismo responsivo allo stress.
ADO Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADO interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.