ADAMTS-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403381

Panoramica

ADAMTS7 codifica ADAMTS-7, una metalloproteasi secreta della famiglia ADAMTS che rimodella la matrice extracellulare attraverso l’elaborazione proteolitica dei componenti della matrice e delle proteine associate. Nei tessuti umani, l’attività di ADAMTS-7 influenza le interazioni cellula–matrice, il comportamento delle cellule muscolari lisce vascolari e i percorsi di turnover della matrice che plasmano l’architettura tissutale e il rimodellamento infiammatorio. Un’espressione o un’attività deregolata di ADAMTS7 è stata collegata a patologie vascolari e a processi correlati all’aterosclerosi, e dinamiche alterate della matrice extracellulare possono anche intersecarsi con risposte tissutali fibrotiche e degenerative. Queste caratteristiche rendono ADAMTS-7 un bersaglio utile per studiare la proteostasi extracellulare, la segnalazione della matrice e fenotipi di rimodellamento rilevanti per la malattia in modelli cellulari e meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADAMTS7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADAMTS7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADAMTS7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADAMTS-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADAMTS7 per lo studio della segnalazione di ADAMTS-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADAMTS7 critici per la funzione di ADAMTS-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADAMTS7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADAMTS-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ADAMTS-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADAMTS7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADAMTS-7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ADAMTS-7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADAMTS7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADAMTS7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.