ACTBL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415610-ACT

ACTBL2は、細胞骨格を構成するアクチンファミリータンパク質であるアクチンβ様2（actin beta-like 2）をコードしており、細胞の形態、接着、運動を支えるフィラメント状アクチン（F-アクチン）ネットワークの編成に関与するとされています。アクチン動態は、細胞質分裂、小胞輸送、メカノトランスダクションなどの主要プロセスを統括し、RhoファミリーGTPアーゼやアクチン結合タンパク質によって制御される経路と連携します。ACTBL2は代表的なACTBほど解析が進んでいないものの、アクチンリモデリングの異常は、異常な遊走・浸潤や組織構築の破綻を伴う表現型全般に広く関係します。そのため、ACTBL2発現の調節は、ストレス応答やシグナル依存的な細胞形態変化に対する細胞骨格の寄与を検討するうえで有用な手がかりとなります。

ACTBL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACTBL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACTBL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACTBL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACTBL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACTBL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACTBL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACTBL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACTBL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACTBL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。