Acid Ceramidase Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419216-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Acid CeramidaseO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Acid Ceramidase (m) e o Plasmídeo Double Nickase Acid Ceramidase (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Asah1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Acid Ceramidase Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-419216-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Acid Ceramidase Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-419216-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene Asah1 de camundongo codifica a ceramidase ácida, uma hidrolase lisossomal que desacetila a ceramida em esfingosina e ácidos graxos livres, controlando assim o equilíbrio entre a sinalização por ceramida e por esfingosina-1-fosfato. Por meio da regulação do turnover de esfingolipídios, a Ceramidase Ácida influencia a composição de membranas, a homeostase endolisossomal, a autofagia e vias de resposta ao estresse que se cruzam com a apoptose e a sinalização inflamatória. A disrupção do catabolismo de ceramida dependente de ASAH1 compromete a depuração de lipídios no lisossomo e altera os reservatórios de esfingolipídios bioativos, processos implicados na neurodegeneração e em fenótipos sistêmicos de armazenamento lipídico. Assim, Asah1 é um nó-chave para o estudo da função lisossomal e de redes de sinalização impulsionadas por esfingolipídios em modelos celulares e in vivo de camundongo.
Acid Ceramidase O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Asah1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Asah1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Asah1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Asah1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.