ACADVL (VLCAD) Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418939

Panoramica

Acadvl codifica la deidrogenasi degli acil-CoA a catena molto lunga (ACADVL/VLCAD), una flavoproteina mitocondriale che catalizza la prima fase di deidrogenazione della β-ossidazione degli acil-CoA degli acidi grassi a catena lunga. Questa attività fornisce equivalenti riducenti al sistema della flavoproteina di trasferimento degli elettroni e sostiene la produzione energetica ossidativa, in particolare nei tessuti con elevata richiesta mitocondriale come cuore, muscolo scheletrico e fegato. L’alterazione di ACADVL compromette il catabolismo lipidico, favorendo l’accumulo di acilcarnitine a catena lunga e spostando il metabolismo cellulare verso un utilizzo compensatorio del glucosio e verso risposte allo stress. In quanto enzima chiave dell’ossidazione degli acidi grassi e dell’omeostasi mitocondriale, Acadvl è ampiamente studiato in modelli di ridotta flessibilità metabolica, disfunzione mitocondriale e tossicità cellulare indotta dai lipidi, rilevanti per la ricerca sugli errori congeniti del metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACADVL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acadvl in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acadvl insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acadvl a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACADVL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acadvl per lo studio della segnalazione di ACADVL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acadvl critici per la funzione di ACADVL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acadvl per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACADVL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACADVL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acadvl. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACADVL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACADVL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acadvl per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acadvl definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.