ACAD-10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404351-ACT

ACAD10は、脂肪酸およびアミノ酸の分解代謝、ならびに酸化的代謝のより広範な制御に関与するとされるミトコンドリアのフラビンタンパク質、アシルCoAデヒドロゲナーゼファミリー10（ACAD-10）をコードします。ミトコンドリアβ酸化に関連する過程の一部として、ACAD-10はアシルCoAの脱水素反応に寄与し、エネルギー恒常性、レドックスバランス、代謝の柔軟性に影響を与えます。ACAD10の発現や活性の変化は、インスリン抵抗性に関連する表現型やミトコンドリアのストレス応答を含む代謝調節異常の経路と関連づけられており、代謝性疾患の機序研究において重要です。そのためACAD-10は、脂質の取り扱い、ミトコンドリア機能、炎症シグナルや細胞ストレスシグナルと交差する栄養感知ネットワークといった文脈で、一般に研究対象となっています。

ACAD-10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACAD10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACAD-10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACAD10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACAD10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACAD-10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACAD10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACAD-10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACAD10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACAD-10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。