Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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3PGDH Double Nickase Plasmid (h): sc-401405-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 3PGDH Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 3PGDH Double-Nickase-Plasmid (h) und 3PGDH Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PHGDH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: 3PGDH: sc-390610
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
3PGDH Double Nickase Plasmid (h) | sc-401405-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
3PGDH Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401405-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHGDH kodiert die 3-Phosphoglycerat-Dehydrogenase (3PGDH), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym, das das glykolytische Zwischenprodukt 3-Phosphoglycerat in den phosphorylierten Serin-Biosyntheseweg umleitet. Durch die Bildung von 3-Phosphohydroxypyruvat und die Unterstützung der nachgeschalteten Verfügbarkeit von Serin und Glycin trägt 3PGDH zum Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel, zur Nukleotidsynthese, zur Redox-Homöostase über NADPH-gekoppelte Reaktionen sowie zum für proliferative Zustände erforderlichen biosynthetischen Flux bei. Eine veränderte PHGDH-Aktivität wurde mit metabolischer Umprogrammierung in Krebsmodellen sowie mit neuroentwicklungsbezogenen Störungen in Verbindung gebracht, die mit Serinmangel verknüpft sind, was ihre Relevanz für Untersuchungen stoffwechselgetriebener zellulärer Phänotypen unterstreicht. Diese Funktionen machen PHGDH zu einem nützlichen Knotenpunkt, um das Zusammenspiel zwischen Glykolyse, Aminosäurehomöostase und mitochondrien-/Folatzyklus-abhängigen Prozessen zu untersuchen.
3PGDH Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PHGDH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PHGDH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PHGDH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PHGDH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.