3PGDH Plasmide Double Nickase (h): sc-401405-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 3PGDH Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 3PGDH Double Nickase Plasmid (h) e il 3PGDH Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PHGDH. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: 3PGDH Antibody (B-1): sc-390610
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
3PGDH Plasmide Double Nickase (h) | sc-401405-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
3PGDH Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401405-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHGDH codifica la 3-fosfoglicerato deidrogenasi (3PGDH), l’enzima limitante della velocità che devia l’intermedio glicolitico 3-fosfoglicerato verso la via di biosintesi della serina fosforilata. Produciendo 3-fosfoidrossipiruvato e sostenendo la disponibilità a valle di serina e glicina, la 3PGDH contribuisce al metabolismo a un carbonio, alla sintesi dei nucleotidi, all’equilibrio redox tramite reazioni legate al NADPH e al flusso biosintetico richiesto negli stati proliferativi. Un’attività alterata di PHGDH è stata associata a un rimodellamento metabolico in modelli di cancro e a disturbi del neurosviluppo legati a carenza di serina, evidenziandone la rilevanza per lo studio di fenotipi cellulari guidati dal metabolismo. Queste funzioni rendono PHGDH un nodo utile per indagare il crosstalk tra glicolisi, omeostasi degli amminoacidi e processi dipendenti dai mitocondri e dal ciclo dei folati.
3PGDH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PHGDH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PHGDH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PHGDH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PHGDH interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.