γENaC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422827

Panoramica

Scnn1g codifica la subunità γ del canale epiteliale del sodio (γENaC), un determinante chiave dell’ingresso di Na⁺ sensibile all’amiloride attraverso le membrane apicali nei tessuti epiteliali. Insieme alle subunità α e β, γENaC regola il trasporto transepiteliale di sodio che influenza l’omeostasi del liquido di superficie delle vie aeree, il riassorbimento renale di sodio e l’equilibrio del volume dei fluidi. L’attività del canale è controllata dall’elaborazione proteolitica e dal traffico di membrana, integrandosi con i programmi responsivi all’aldosterone e con reti di trasporto ionico a valle, come la gestione dei sali accoppiata alla Na⁺/K⁺-ATPasi. La disregolazione delle subunità di ENaC è stata collegata a fenotipi di idratazione epiteliale e bilancio salino alterati, a supporto della sua rilevanza negli studi di fisiologia delle vie aeree e del rene e dei relativi disturbi del trasporto ionico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO γENaC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Scnn1g in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Scnn1g insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Scnn1g a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina γENaC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Scnn1g per lo studio della segnalazione di γENaC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Scnn1g critici per la funzione di γENaC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Scnn1g per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal γENaC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal γENaC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Scnn1g. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal γENaC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR γENaC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Scnn1g per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Scnn1g definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.