β-casein Plasmide Double Nickase (h): sc-402248-NIC

CSN2 codifica la β-caseina umana, una delle principali fosfoproteine secrete del latte, che contribuisce alla formazione delle micelle e facilita il trasporto di calcio, fosfato e peptidi bioattivi durante l’allattamento. La sua espressione è strettamente regolata nell’epitelio mammario dalla segnalazione degli ormoni lattogeni, in particolare dall’asse prolattina–JAK2/STAT5, con ulteriori contributi del recettore dei glucocorticoidi e delle vie insulina/PI3K, che coordinano differenziamento e funzione secretoria. La regolazione alterata della β-caseina è ampiamente utilizzata come indicatore dello stato di differenziamento dell’epitelio mammario e dei programmi trascrizionali associati alla lattazione, rendendo CSN2 un utile marcatore molecolare negli studi sullo sviluppo della ghiandola mammaria e sul controllo endocrino dell’espressione genica. Reti geniche delle proteine del latte deregolate, incluse quelle che coinvolgono CSN2, vengono spesso analizzate in contesti quali una fisiologia dell’allattamento compromessa e cambiamenti nei programmi di linea epiteliale rilevanti per la ricerca sulla biologia della mammella.

β-casein Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CSN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CSN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CSN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CSN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.