β-1,4-GalNAc-T3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-415306-LAC

B4GALNT3 codifica a β-1,4-GalNAc-T3, uma glicosiltransferase residente no complexo de Golgi que transfere N-acetilgalactosamina numa ligação β1,4 para gerar motivos glicânicos terminais específicos do tipo LacdiNAc em glicoproteínas e glicolipídios. Ao moldar o ramificação dos glicanos e as estruturas terminais, a β-1,4-GalNAc-T3 influencia a estabilidade proteica, as interações receptor–ligante e a adesão célula–célula dentro da via secretória e de redes mais amplas de glicosilação. A expressão alterada de B4GALNT3 tem sido associada a assinaturas de glicosilação desreguladas observadas na biologia do câncer e em contextos inflamatórios, nos quais mudanças nos glicanos de superfície podem modular a sinalização e o reconhecimento imune. Assim, este gene é relevante para estudar a regulação dependente do “código glicânico” do tráfego de membrana, das interações com a matriz extracelular e da atividade de receptores em vias específicas.

As Partículas de Ativação Lentivirais β-1,4-GalNAc-T3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de B4GALNT3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais β-1,4-GalNAc-T3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição B4GALNT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de β-1,4-GalNAc-T3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo B4GALNT3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.