ZWINT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405718

概要

ZWINT（ZW10相互作用キネトコアタンパク質）は、外側キネトコアに保存的に存在する構成要素で、有糸分裂における微小管の安定した結合と正確な染色体分配を支えます。ZW10/RZZ複合体と相互作用し、紡錘体形成チェックポイント（SAC）シグナル伝達にも寄与することで、キネトコア‐微小管動態を細胞周期の進行と結び付けます。ZWINTの発現や機能の異常は、複数のがんで観察される染色体不安定性や増殖性表現型と関連づけられており、異数性やゲノム維持の研究において重要です。有糸分裂の制御因子として、ZWINTはチェックポイント制御、キネトコア構造、有糸分裂ストレス応答を結ぶ経路の中でしばしば検討されています。

ZWINT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZWINT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZWINT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZWINTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ZWINTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ZWINTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZWINT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ZWINTの機能に不可欠なZWINTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZWINTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ZWINT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZWINT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZWINT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ZWINT HDRプラスミド（h）および ZWINT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZWINTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZWINT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。