ZO-1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423407-NIC

O gene **Tjp1** de camundongo codifica a proteína de ancoragem das junções estreitas **ZO-1 (TJP1)**, um membro da família das guanilato-quinases associadas à membrana, que conecta claudinas e ocludina ao citoesqueleto cortical de actina para organizar a polaridade ápico–basal e a função de barreira paracelular. A ZO-1 participa da montagem e da manutenção das junções estreitas, integrando sinais da dinâmica do citoesqueleto regulada por GTPases da família Rho e da mecanotransdução nas junções, e pode influenciar vias de sinalização dependentes de contato que coordenam a organização epitelial. Alterações na localização ou na expressão de ZO-1 são comumente usadas como um indicador da integridade das junções estreitas em modelos de disfunção de barreira epitelial e endotelial. Em sistemas murinos, a perturbação de **Tjp1** dá suporte a estudos mecanísticos de permeabilidade, remodelamento de barreira associado à inflamação e processos de desenvolvimento que exigem uma arquitetura juncional precisa.

ZO-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Tjp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Tjp1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Tjp1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Tjp1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.