ZNRF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418162

概要

ZNRF3（zinc and ring finger 3）は、膜貫通型のE3ユビキチンリガーゼをコードしており、細胞表面のFrizzledおよびLRP5/6受容体複合体のユビキチン化と分解（ターンオーバー）を促進することで、Wnt/β-カテニンシグナル伝達に対する負のフィードバック制御因子として働きます。R-spondinおよびLGR受容体との相互作用を介して、ZNRF3は経路のシグナル強度を調整し、幹細胞の維持、組織恒常性、分化プログラムに影響を与えます。ZNRF3による受容体制御が破綻すると、Wntシグナルが増強され、増殖や系譜決定を制御する転写出力が変化し得ます。ZNRF3の遺伝学的・機能的異常はWnt依存性の疾患病態に関与することが示唆されており、シグナル経路制御の機構研究において有用な結節点（ノード）となります。

ZNRF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZNRF3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZNRF3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZNRF3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ZNRF3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ZNRF3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZNRF3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ZNRF3の機能に不可欠なZNRF3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZNRF3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ZNRF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZNRF3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZNRF3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ZNRF3 HDRプラスミド（h）および ZNRF3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZNRF3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZNRF3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。