ZNF462 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412915-ACT

ZNF462 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an der chromatinabhängigen Regulation der Genexpression während der Entwicklung und der Festlegung von Zellschicksalen beteiligt ist. Man geht davon aus, dass er Transkriptionsprogramme moduliert, indem er sequenzspezifische DNA-Bindung mit epigenetischen Kontrollmechanismen koordiniert, die Lineage-Festlegung, Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Eine Störung oder veränderte Dosierung von ZNF462 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und kraniofazialen Auffälligkeiten in Verbindung gebracht, was seine Rolle in entwicklungsrelevanten genregulatorischen Netzwerken stützt. In experimentellen Systemen wird ZNF462 hinsichtlich seines Einflusses auf die Transkriptionskontrolle, die Chromatinorganisation und nachgeschaltete Signalwege untersucht, die die neuronale und mesenchymale Differenzierung steuern.

ZNF462 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF462-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF462 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF462-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF462-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF462-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF462-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF462-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF462-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF462-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.