Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZNF326: sc-404968-ACT

ZNF326 code une protéine nucléaire contenant des doigts de zinc, impliquée dans la régulation transcriptionnelle et le traitement de l’ARN, avec des rôles rapportés dans la coordination de l’épissage co‑transcriptionnel et de programmes d’expression génique qui soutiennent le maintien de l’état cellulaire. En tant que facteur associé à la chromatine, ZNF326 peut influencer l’architecture régulatrice proximale des promoteurs et le couplage entre la transcription et la maturation du pré‑ARNm, ce qui le relie à des voies contrôlant la prolifération, la différenciation et l’expression génique adaptative au stress. Une expression ou une activité dérégulée de ZNF326 a été associée dans la littérature à une altération des réseaux transcriptionnels en biologie du cancer et dans d’autres contextes où un métabolisme de l’ARN aberrant contribue à des phénotypes pathologiques. Ces caractéristiques font de ZNF326 une cible utile pour des études mécanistiques du dialogue transcription–épissage et du remodelage des réseaux de régulation.

ZNF326 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF326 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZNF326 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF326 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF326, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZNF326. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF326 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZNF326 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZNF326 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF326 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.