Plásmido CRISPR de Activación (m) ZNF143: sc-423169-ACT

El gen murino **Zfp143** codifica el factor de transcripción **ZNF143**, una proteína de unión al ADN específica de secuencia que contribuye a la arquitectura de los promotores y a programas transcripcionales de amplio alcance. ZNF143 participa en la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II, en la organización de la cromatina y en la regulación de redes génicas asociadas al ciclo celular y a la replicación, incluidos genes vinculados al inicio de la replicación del ADN y a la estabilidad del genoma. Debido a estas funciones, las alteraciones en la expresión de ZNF143 se estudian con frecuencia en el contexto del control de la proliferación, la desregulación transcripcional y la remodelación de la expresión génica en respuesta al estrés. En sistemas murinos, **Zfp143** constituye un nodo útil para diseccionar circuitos regulatorios que influyen en programas del desarrollo y en estados transcripcionales relevantes para enfermedades.

ZNF143 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Zfp143 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZNF143 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Zfp143 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Zfp143, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZNF143. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Zfp143 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZNF143 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZNF143 en células tumorales con expresión de Zfp143 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.