ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412894

概要

ZFYVE28 は、エンドソーム膜上のホスファチジルイノシトール3-リン酸（phosphatidylinositol 3-phosphate）を認識する FYVE ドメイン含有タンパク質をコードしており、ホスホイノシチドシグナル伝達と膜輸送・タンパク質ソーティングを結び付ける役割を担います。エンドサイトーシス機構の構成要素との相互作用を通じて、ZFYVE28 は受容体の内在化、エンドソーム成熟、ならびにシグナル伝達複合体の空間的配置の制御に関与すると考えられています。これらの過程は、成長因子受容体のターンオーバーや下流シグナルの動態を制御する経路と交差するため、ZFYVE28 はシグナル減衰や小胞輸送の研究において重要です。エンドソーム輸送の異常やホスホイノシチド依存的ソーティングの破綻は、細胞恒常性の変化と関連し、増殖関連や神経生物学的表現型を含む複数の疾患関連コンテキストで示唆されています。

ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZFYVE28遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZFYVE28内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZFYVE28のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ZFYVE28タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ZFYVE28シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZFYVE28欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ZFYVE28の機能に不可欠なZFYVE28エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZFYVE28ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZFYVE28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZFYVE28遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ZFYVE28 HDRプラスミド（h）および ZFYVE28 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZFYVE28ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZFYVE28標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。