Plásmido Doble Nickase (h) ZFYVE27: sc-407267-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ZFYVE27 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ZFYVE27 (h) y el plásmido de doble nickasa ZFYVE27 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ZFYVE27. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ZFYVE27 | sc-407267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ZFYVE27 | sc-407267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZFYVE27 (también conocido como protrudin) codifica una proteína que contiene un dominio FYVE, que se une al fosfatidilinositol 3-fosfato y se asocia a membranas endosómicas para coordinar el tráfico de membranas. Participa en el transporte desde endosomas hacia la membrana plasmática, el crecimiento de neuritas y la dinámica de vesículas dependiente de microtúbulos mediante interacciones con GTPasas Rab, motores de kinesina y componentes de los sitios de contacto entre el retículo endoplásmico y los endosomas. Al acoplar la clasificación endosomal con el transporte polarizado, ZFYVE27 influye en la morfogénesis neuronal y en vías de mantenimiento axonal. La desregulación del tráfico asociado a ZFYVE27 se ha vinculado con fenotipos neurodegenerativos, incluidos mecanismos relacionados con la paraplejia espástica hereditaria, lo que lo hace relevante para estudiar la axonopatía y los defectos del transporte intracelular.
ZFYVE27 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ZFYVE27 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ZFYVE27. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ZFYVE27. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ZFYVE27 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.