ZFR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407242-ACT

A ZFR humana (proteína ligante de RNA com dedo de zinco) é um fator de ligação a RNA predominantemente nuclear, implicado na regulação gênica pós-transcricional, incluindo a modulação do splicing de pré-mRNA e do processamento de RNA por meio de interações com complexos do spliceossomo e ribonucleoproteicos. Ao moldar o uso de isoformas de transcritos e o destino do RNA, a ZFR pode influenciar programas de estado celular como proliferação, diferenciação e expressão gênica responsiva ao estresse. O processamento de RNA desregulado é uma característica comum do câncer e de distúrbios do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, tornando a ZFR um alvo relevante para estudos mecanísticos de redes regulatórias de RNA. Investigar a função da ZFR pode ajudar a esclarecer como vias ligadas ao splicing e proteínas ligantes de RNA coordenam os resultados de expressão gênica em células humanas.

ZFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZFR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZFR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZFR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZFR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZFR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZFR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZFR em células tumorais com expressão de ZFR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.