ZFHX4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429838-ACT

Zfhx4 codifica a proteína homeobox de dedo de zinco ZFHX4 do camundongo, um grande fator de transcrição ligante de DNA implicado no controle transcricional de longo alcance durante o desenvolvimento. A ZFHX4 está associada à regulação de programas de especificação de linhagem e de diferenciação neuronal, vinculando-a à modulação do estado da cromatina e ao controle coordenado de redes de expressão gênica. A expressão alterada de ZFHX4 ou perturbações regulatórias têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e foram relatadas em estudos de biologia tumoral, sustentando sua relevância para vias que governam proliferação, diferenciação e identidade celular. Essas características tornam o Zfhx4 um alvo útil para investigar circuitos transcricionais e alterações regulatórias de genes associadas a doenças em sistemas modelo murinos.

ZFHX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zfhx4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZFHX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zfhx4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zfhx4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZFHX4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zfhx4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZFHX4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZFHX4 em células tumorais com expressão de Zfhx4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.