Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB5 (m): sc-432923

Présentation

Zbtb5 code pour ZBTB5, un facteur de transcription à domaines BTB/POZ et doigts de zinc C2H2, qui permet une liaison à l’ADN spécifique de séquence et l’assemblage de complexes régulateurs contrôlant des programmes d’expression génique. Dans les cellules murines, les facteurs de la famille ZBTB sont fréquemment associés à une répression transcriptionnelle dépendante de la chromatine, ou à une activation dépendante du contexte via le recrutement de corégulateurs, modulant des processus tels que la progression du cycle cellulaire, l’engagement de lignée et la différenciation cellulaire. En influençant des réseaux transcriptionnels qui régissent la prolifération et l’état développemental, ZBTB5 est pertinent pour des études mécanistiques de la dérégulation de la régulation génique observée lors de la transformation oncogénique et d’autres pathologies liées à la transcription. L’étude fonctionnelle de Zbtb5 peut clarifier comment les protéines BTB–doigts de zinc intègrent l’activité des promoteurs et des enhancers afin de coordonner les voies en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zbtb5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zbtb5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zbtb5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZBTB5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zbtb5 pour l'étude de la signalisation de ZBTB5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zbtb5 essentiels à la fonction de ZBTB5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zbtb5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZBTB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZBTB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zbtb5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZBTB5 plasmide HDR (m) et le ZBTB5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zbtb5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zbtb5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.