Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Zap-70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423755
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Zap-70 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Zap-70, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ZAP-70 Anticorpo (1E7.2): sc-32760
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Zap-70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423755 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Zap70 codifica a tirosina quinase citosólica ZAP-70, um mediador central de sinalização a jusante do receptor de células T (TCR) e do complexo CD3, que conecta o reconhecimento de antígeno a cascatas intracelulares de fosforilação. Após o engajamento do TCR, a ZAP-70 é recrutada aos ITAMs fosforilados nas cadeias do CD3 e propaga a sinalização por meio do arcabouço LAT/SLP-76, promovendo a ativação de PLCγ1, o influxo de cálcio, a sinalização por MAPK e programas transcricionais mediados por NFAT/NF-κB/AP-1. Na biologia imunológica de camundongos, Zap70 é essencial para a seleção de timócitos, a maturação de células T e as respostas efetoras, tornando-se central para estudos de imunidade adaptativa e redes de sinalização de linfócitos. A atividade desregulada da via de ZAP-70 é relevante em modelos de imunodeficiência, autoimunidade e biologia de neoplasias linfoides, nos quais limiares de sinalização alterados influenciam o desenvolvimento e a ativação.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Zap-70 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Zap70 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Zap70, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Zap70 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Zap-70.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Zap70 para a investigação da sinalização de Zap-70, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Zap70 críticos para a função Zap-70
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Zap70 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Zap-70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Zap-70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Zap70. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Zap-70 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Zap-70 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Zap70 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Zap70 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.