Zap-70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423755

Übersicht

Zap70 kodiert die zytosolische Tyrosinkinase ZAP-70, einen zentralen Signalvermittler stromabwärts des T‑Zell-Rezeptors (TCR) und des CD3-Komplexes, der die Antigenerkennung mit intrazellulären Phosphorylierungskaskaden verknüpft. Nach Bindung an den TCR wird ZAP-70 an phosphorylierte ITAMs der CD3-Ketten rekrutiert und leitet die Signalweitergabe über die Gerüstproteine LAT/SLP‑76 fort, was die Aktivierung von PLCγ1, Calciumfluss, MAPK-Signalisierung sowie die Transkriptionsprogramme von NFAT/NF‑κB/AP‑1 antreibt. In der Mausimmunbiologie ist Zap70 essenziell für die Selektion von Thymozyten, die T‑Zell-Reifung und Effektorantworten und steht damit im Zentrum von Studien zur adaptiven Immunität und zu Signalnetzwerken in Lymphozyten. Eine fehlregulierte Aktivität des ZAP‑70-Signalwegs ist in Modellen von Immundefizienz, Autoimmunität und der Biologie lymphoider Malignome relevant, bei denen veränderte Signal-Schwellenwerte Entwicklung und Aktivierung beeinflussen.

Das Zap-70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zap70-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zap70-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zap70 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Zap-70-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zap70-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Zap-70-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zap70-Exone abzielen, die für die Zap-70-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zap70-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Zap-70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Zap-70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zap70-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Zap-70 HDR-Plasmid (m) und Zap-70 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zap70-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zap70-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.