Z39Ig CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404067-ACT

Humanes VSIG4 (Z39Ig) kodiert einen mit der B7-Familie verwandten immunregulatorischen Rezeptor, der überwiegend auf gewebeständigen Makrophagen exprimiert wird, einschließlich Kupffer-Zellen, wo er die Kommunikation zwischen angeborener und adaptiver Immunantwort moduliert. VSIG4 fungiert als Komplementrezeptor für C3-Fragmente und ist an der phagozytischen Clearance sowie an der Suppression der T‑Zell-Aktivierung beteiligt, wodurch es den Entzündungsgrundton im Gewebemikromilieu prägt. Über diese Aktivitäten beeinflusst Z39Ig die komplementvermittelte Opsonisierung, Programme der Makrophagenpolarisierung und ein Immuncheckpoint‑ähnliches Signalgeschehen, das eine überschießende Zytokinproduktion begrenzt. Eine fehlregulierte VSIG4-Expression und makrophagenassoziierte Signalwege werden häufig in Zusammenhängen wie chronischer Entzündung, Fibrose, Infektionsbiologie und Mechanismen der Tumor‑Immunevasion untersucht.

Z39Ig Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen VSIG4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Z39Ig Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des VSIG4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der VSIG4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Z39Ig-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native VSIG4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Z39Ig-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Z39Ig-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem VSIG4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.