YAP Plasmide Double Nickase (h): sc-400040-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- YAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il YAP Double Nickase Plasmid (h) e il YAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira YAP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: YAP Antibody (G-6): sc-376830
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
YAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-400040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
YAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
YAP1 codifica il co-attivatore trascrizionale YAP, un effettore centrale della via di segnalazione Hippo che integra densità cellulare, segnali meccanici e polarità per controllare proliferazione, apoptosi e dimensioni degli organi. Quando le chinasi Hippo sono inattive, YAP si accumula nel nucleo e si associa ai fattori di trascrizione della famiglia TEAD per regolare programmi genici legati alla crescita, al rimodellamento del citoscheletro e alla segnalazione della matrice extracellulare. Un’attività di YAP deregolata è implicata in un’alterata inibizione da contatto, nelle dinamiche epitelio–mesenchimali e in fenotipi di tipo staminale, ed è frequentemente studiata in oncologia, nella fibrosi e nei processi rigenerativi. YAP interagisce anche con le vie di segnalazione GPCR, Wnt/β-catenina e TGF-β, rendendo YAP1 un nodo utile per mappare il crosstalk tra pathway e il riassetto delle reti trascrizionali.
YAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus YAP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di YAP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di YAP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con YAP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.