YAP CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423742-ACT

マウスのYap1は、Hippoシグナル伝達経路の中心的エフェクターとして機能する転写共活性化因子YAPをコードしており、機械的刺激、細胞極性、ならびに細胞骨格ダイナミクスを統合して、増殖、アポトーシス抵抗性、組織成長を制御する。YAPはTEADファミリー転写因子と協調することで、臓器サイズ制御、再生、上皮–間葉プログラムに関与する遺伝子発現プログラムを制御する。YAP活性の異常およびHippo経路の破綻は、がん化、線維化、幹／前駆細胞の挙動変化に関与するとされ、Yap1は経路マッピング研究で頻繁に標的となる。マウスモデルでは、YAP依存的転写は、発生パターニングや、細胞外マトリックスの硬さおよびGPCRシグナルに対する文脈依存的応答を解析するために広く用いられている。

YAP CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Yap1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

YAP CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Yap1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はYap1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性YAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のYap1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるYAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびYap1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるYAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。