Plasmide CRISPR d'Activation (h) XBP1: sc-400131-ACT

XBP1 (X-box binding protein 1) est un facteur de transcription bZIP qui agit comme un effecteur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), en aval de la signalisation du stress du réticulum endoplasmique (RE). Après l’épissage médié par IRE1, XBP1 actif met en place des réseaux transcriptionnels qui augmentent la capacité de repliement du RE, renforcent la dégradation associée au RE (ERAD) et favorisent la biosynthèse des lipides ainsi que l’homéostasie de la voie sécrétoire. L’activité de XBP1 influence la différenciation et la fonction des types cellulaires sécréteurs et module des programmes des cellules immunitaires, notamment le développement des plasmocytes et les sorties de signalisation inflammatoire. Un dérèglement de la signalisation XBP1/UPR a été impliqué dans l’adaptation des cellules cancéreuses au stress protéotoxique, les maladies métaboliques et la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible largement utilisée pour des études mécanistiques sur la résilience au stress et la protéostasie.

XBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

XBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de XBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de XBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie XBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de XBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.