WTAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (bovine): sc-437360-ACT

WTAP (proteína associada ao tumor de Wilms 1) é um componente central do complexo “writer” de N6-metiladenosina (m6A) em mRNA, cooperando com METTL3/METTL14 para coordenar o controle dependente de metilação do splicing de RNA, da estabilidade, da exportação nuclear e da tradução. Em células bovinas, a regulação de m6A mediada por WTAP influencia a progressão do ciclo celular, a especificação de linhagem e programas de expressão gênica responsivos ao estresse por meio da remodelação pós-transcricional dos transcriptomas. Ao moldar o destino de mRNAs regulatórios-chave, WTAP impacta vias que governam proliferação e diferenciação, e alterações na atividade de WTAP têm sido associadas a crescimento desregulado e sinalização do tipo oncogênica em múltiplos contextos biológicos. Essas características tornam WTAP um alvo relevante para estudos mecanísticos do controle epitranscriptômico no desenvolvimento, no metabolismo e em fenótipos celulares relevantes para doenças.

WTAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (bovine) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WTAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (bovine) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WTAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WTAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WTAP em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.