Wnt-5b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423719

Übersicht

Das murine Gen Wnt5b kodiert das sekretierte Glykoprotein Wnt-5b, einen nicht-kanonischen Wnt-Liganden, der während der Entwicklung und der Gewebehomöostase die Zellpolarität, gerichtete Migration und Zytoskelett-Remodellierung reguliert. Wnt-5b signalisiert bevorzugt über β-Catenin-unabhängige Signalwege wie die planare Zellpolarität (PCP) und Wnt/Ca2+-Signalgebung. Dabei bindet es an Rezeptoren wie Frizzled und an Korezeptoren wie Tyrosinkinasen der ROR-Familie, um nachgeschaltete Aktivitäten von JNK, PKC und kleinen GTPasen zu modulieren. Diese Signalwege beeinflussen die Morphogenese, die neuronale Musterbildung und die stromal-epitheliale Kommunikation; zudem wurde eine dysregulierte WNT5B-Expression in krankheitsbezogenen Kontexten mit veränderten Differenzierungsprogrammen und invasivem Zellverhalten in Verbindung gebracht. Als Knotenpunkt, der mit entzündlichen Signalwegen und Signalen aus der extrazellulären Matrix verknüpft ist, wird Wnt-5b häufig in Modellen der Entwicklung, des Stoffwechsels und der Biologie des Tumormikromilieus untersucht.

Das Wnt-5b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wnt5b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wnt5b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wnt5b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-5b-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wnt5b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-5b-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Wnt5b-Exone abzielen, die für die Wnt-5b-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wnt5b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Wnt-5b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Wnt-5b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wnt5b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-5b HDR-Plasmid (m) und Wnt-5b HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wnt5b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wnt5b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.