Partículas Lentivirales de Activación (m2) WDR5: sc-431247-LAC-2

El gen murino Wdr5 codifica WDR5, una proteína andamiaje conservada con repeticiones WD40 que constituye un componente central de los complejos metiltransferasa de histona H3K4 de la familia SET/MLL y coordina factores de ensamblaje asociados a la cromatina para regular programas transcripcionales. WDR5 sustenta el control epigenético de la expresión génica mediante la regulación de promotores y potenciadores (enhancers), influyendo en la progresión del ciclo celular, la especificación de linaje y el patrón del desarrollo, y se integra con redes más amplias de remodelación de la cromatina y procesamiento de ARN. Los estados de cromatina dependientes de WDR5 desregulados se asocian con alteraciones en la diferenciación y fenotipos proliferativos observados en el cáncer y otros trastornos impulsados por mecanismos epigenéticos, lo que convierte a Wdr5 en un objetivo valioso para estudios mecanísticos de la regulación transcripcional. La edición génica de Wdr5 en modelos murinos permite el análisis funcional de las vías de metilación de H3K4, el mapeo de interacciones proteína–proteína dentro de los complejos COMPASS/MLL y la investigación de efectos específicos del contexto en la biología de las células madre y la homeostasis tisular.

Las partículas de activación lentiviral WDR5 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Wdr5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral WDR5 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Wdr5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de WDR5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Wdr5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.