WBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409856-ACT

WBP2 (WW domain binding protein 2) funge da adattatore e co-regolatore trascrizionale, interagendo con partner contenenti domini WW e integrando input di segnalazione nei programmi di espressione genica. Partecipa a vie associate alla segnalazione recettoriale e nucleare, inclusa la regolazione della trascrizione tramite interazioni con complessi coattivatori e la modulazione di output trascrizionali legati a proliferazione e differenziamento. L’attività di WBP2 è stata studiata nel contesto di stati di segnalazione alterati nella biologia dei tumori, in cui cambiamenti nelle reti di co-regolazione possono influenzare la crescita cellulare e i fenotipi migratori. Queste proprietà rendono WBP2 un nodo utile per indagare i circuiti trascrizionali, la regolazione genica dipendente dal segnale e il rimodellamento di vie specifiche del contesto nelle cellule umane.

WBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WBP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WBP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WBP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WBP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WBP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WBP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WBP2 nelle cellule tumorali con espressione di WBP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.