VSTM2L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-414330-ACT

VSTM2L (V-set and transmembrane domain containing 2 like) codifica una proteina associata alla membrana con un dominio V-set di tipo immunoglobulinico, arricchita nei tessuti neurali e implicata nella comunicazione cellula-cellula e nella segnalazione extracellulare. I profili di espressione riportati e gli studi funzionali collegano VSTM2L alla differenziazione neuronale e ai processi sinaptici, suggerendo un ruolo nella regolazione dei programmi di neurosviluppo e dell’attività delle reti neuronali. In quanto fattore associato alla superficie cellulare/alla secrezione, VSTM2L è spesso studiata in vie che governano la segnalazione intercellulare, la regolazione trascrizionale a valle di segnali mediati da recettori e l’espressione genica specifica di tessuto. L’espressione deregolata di VSTM2L è stata esplorata come caratteristica molecolare in ambiti di ricerca neurologica e neuropsichiatrica e in studi più ampi su firme trascrizionali associate al cervello.

VSTM2L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VSTM2L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VSTM2L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VSTM2L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VSTM2L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VSTM2L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VSTM2L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VSTM2L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VSTM2L nelle cellule tumorali con espressione di VSTM2L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.