Vitamin D Receptor/VDR Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400171-LAC

VDR codifica il recettore della vitamina D, un recettore nucleare attivato da ligando che eterodimerizza con RXR e si lega agli elementi di risposta alla vitamina D per regolare programmi trascrizionali che controllano l’omeostasi di calcio e fosfato, la differenziazione epiteliale e la modulazione immunitaria. La segnalazione mediata da VDR interseca il rimodellamento della cromatina e il reclutamento di co-regolatori, plasmando un’espressione genica specifica del tipo cellulare e influenzando la funzione di barriera, le risposte citochiniche e le vie metaboliche. Un’attività di VDR e una segnalazione della vitamina D deregolate sono state associate a un’alterata segnalazione infiammatoria, a disturbi dell’osso e del metabolismo minerale e a cambiamenti nella biologia tumorale in molteplici tessuti. Il VDR umano è quindi ampiamente studiato nella regolazione trascrizionale, in endocrinologia, in immunologia e nel controllo epigenetico delle reti geniche.

Le particelle di attivazione lentivirale Vitamin D Receptor/VDR (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di VDR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Vitamin D Receptor/VDR (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione VDR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Vitamin D Receptor/VDR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo VDR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.