Vigilin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431035

Descripción general

El gen Hdlbp de ratón codifica la vigilina, una gran proteína de unión a ARN con múltiples dominios KH que se asocia con ARNm y complejos ribonucleoproteicos para influir en la estabilidad, la localización y la traducción de los transcritos. La vigilina se ha vinculado a la regulación de la expresión génica del metabolismo de lípidos y esteroles mediante interacciones con ARNm específicos, conectándola con vías más amplias que controlan el equilibrio energético celular y la homeostasis de membranas. También participa en el control génico posranscripcional durante la proliferación y las respuestas al estrés, en consonancia con funciones en el procesamiento de ARN y la regulación translacional. La desregulación de redes de ARN asociadas a la vigilina se ha investigado en contextos que incluyen fenotipos metabólicos y programas de expresión génica alterados relevantes para mecanismos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Vigilin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hdlbp en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hdlbp junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hdlbp tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Vigilin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hdlbp para la investigación de la señalización de Vigilin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hdlbp críticos para la función de Vigilin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hdlbp para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Vigilin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Vigilin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hdlbp. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Vigilin (m) y el plásmido HDR Vigilin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hdlbp para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hdlbp definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.